什么荧光显微镜?

 2021-01-07        2358

荧光显微镜是光学显微镜的一种,一般被观察物是透明的,或者内部结构不能很好地从颜色上进行很好的区分,那么荧光显微镜是一个不错的选择,能够解决普通显微镜无法观察透明物质的问题。荧光显微镜其原理是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,从而让观察者对样品的内部结构进行观察。在荧光显微镜上,必须在标本的照明光中,选择出特定波长的激发光,以产生荧光,然后必须在激发光和荧光混合的光线中,单把荧光分离出来以供观察。因此,在选择特定波长中,滤光片系统成为极其重要的角色。荧光显微镜广泛应用于生物,医学等领域。 

荧光显微镜包括以下基本元件:

a.光源: 通常是氙弧灯或汞灯,但近年来也使用高功率LED

b.滤光片(入射光): 将入射光波长缩减到只留下用于激发样品的波长,有趣的是,其被称为激发滤光片

c.二向分色镜或反射镜:  将激发光反射到样品上,并同时只通过来自样品的发射光,传递到检测仪(如下图)

d.滤光片(发射光): 只能通过来自样品的发射光波长,并阻挡所有通过激发滤光片的光线,如您所想,其被称为发射滤光片

e.CCD照相机: 发射光如果不能检测到,则没有任何用处;对于荧光成像来说,检测仪通常是CCD照相机,这种照相机一般也连接到电脑屏幕,能够为您呈现图像


二向分色镜_副本

二向分色镜允许较长波长的光线通过滤光片,同时反射较短波长的光线

荧光显微镜分类: 

荧光显微镜一般分为透射和落射式两种类型: 

a.透射式:激发光来自被检物体的下方,聚光镜为暗视野聚光镜,使激发光不进入物镜,而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮,而高倍则暗,在油浸和调中时,较难操作,尤以低倍的照明范围难于确定,但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。  

b.落射式:透射式目前几乎被淘汰,新型的荧光显微镜多为落射式,光源来自被检物体的上方,在光路中具有分光镜,所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用,不仅便于操作,而且从低倍到高倍,可以实现整个视场的均匀照明。  


落射显微镜

落射荧光显微镜的典型光路

 
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