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长光辰谱是一家集光学薄膜研制、新型光谱仪器研发、光谱图像处理与应用于一体的高新技术企业。

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常见问题


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线性渐变滤光片之所谓“线性”,因为其不同位置的光谱特性不同,而且随着空间位置的变化呈线性变化。线性渐变滤光片具有波长渐变、通道可选、性能稳定等优点,由于采用了离子辅助法或离子束溅射法等工艺,通过在基底表面镀制多层厚度变化的膜系而形成楔形膜层,因此光谱特性线性变化。

相比传统的窄带滤光片,线性渐变滤光片具有接近连续的光谱通道,因此采用线性渐变滤光片进行分光可以获得较高的光谱分辨率。相比于棱镜和光栅型等光谱成像仪,基于线性渐变滤光片的光谱成像仪具有高集成度、高稳定性和高分辨率等特点,其整机结构紧凑,体积小重量轻,同时研发和制造成本较低,具有很好的应用前景。线性渐变滤光片还可用于便携式分光计、光栅二级次光分离/截至、激光反射镜设计等方面和领域。

 

线性渐变滤光片(LVF)是继棱镜、光栅以及近期发展的多种分光元件之后发展起来的一种新型分光元件,它与棱镜、光栅等传统的分光元件相比具有体积小、通带多、通带位置可以任意设计等优点。由于线性渐变滤光片可与CCD/CMOS探测器列阵结合共同构成可识别光谱的探测器,大大简化分光系统,提高仪器的可靠性、稳定性和光学效率,受到越来越多的关注。以线性渐变滤光片为核心分光元件的光谱仪已经成功应用到航空航天、野外探测、大气监测、食品安全监测、生物流体分析和多/高/超光谱成像等多个领域。

应用:

光谱成像技术

相比于棱镜和光栅型等光谱成像仪,基于线性渐变滤光片的光谱成像仪具有高集成度、高稳定性和高分辨率等特点,其整机结构紧凑,体积小重量轻,同时研发和制造成本较低,具有很好的应用前景。

线性渐变滤光片还可用于便携式分光计、光栅二级次光分离/截止、激光反射镜设计等方面和领域。


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截止范围:截止范围是用于表示通过滤光片衰减的能量光谱区域的波长间隔。阻断程度通常会在光密度中指定。

 

光密度(OD): OD是optical density(光密度)的缩写,当光经过一个样本时,部分光会被吸收。OD表示光密度描述被滤光片阻断或拒绝的能量,是检测方法里的专有名词,检测单位用OD值表示,OD=lg(1/trans),其中trans为检测物的透光值。高光密度值表示低透射率,低光密度则表示高透射率。6.0或更大的光密度用于极端的阻断需求,如拉曼光谱或荧光显微镜。3.0-4.0的光密度是激光分离和净化、机器视觉和化学检测的理想选择,而 2.0 或更少的光密度是颜色排序和分离光谱顺序的理想选择。

OD*表示截止,根据OD1~OD6,截止带透过率从0.1~0.000001
OD编号 截止带透过率
OD1 =0.1 即10%
OD2 =0.01 即1%
OD3 =0.001 即0.1%
OD4 =0.0001 即0.01%
OD5 =0.00001 即0.001%
OD6 =0.000001 即0.0001%

截止号   截止带

A       400~1100nm

B       300~1200nm

C       200~2000nm

D       400~700nm

E       400~800nm

F       400~1000nm

G      300~900nm

H      500~1000nm

I        800~1000nm

J        700~1200nm

K       200~1100nm

L       200~1200nm

M      200~1400nm

N      400~1200nm

O      200~1150nm

P       200~800nm

Q      350~700nm

U      200~700nm

V      300~950nm

W     200~1000nm

X      200~750nm

举例:

OD3-A :截止范围为400~1100nm内光波的透过率为0.001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD3-B:截止范围为300~1200nm内光波的透过率为0.001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD3-C :截止范围为200~2000nm内光波的透过率为0.001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD3-D :截止范围为400~700nm内光波的透过率为0.001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD3-K :截止范围为200~1100nm内光波的透过率为0.001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD4-A :截止范围为400~1100nm内光波的透过率为0.0001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD4-B :截止范围为300~1200nm内光波的透过率为0.0001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD4-C :截止范围为200~2000nm内光波的透过率为0.0001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD4-D :截止范围为400~700nm内光波的透过率为0.0001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

OD4-K :截止范围为200~1100nm内光波的透过率为0.0001,中心波长两侧各1/2带宽范围波段除外

起始波长是用于表示在滤光片中透射率增加至50%波长的术语。起始波长由下图中的λcut-on起始表示。

截止波长是用于表示在滤光片中透射率衰减至50%波长的术语。截止波长由下图中的λcut-off截止表示。

截止波长说明图


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光学滤光片:滤光片是用来选取所需辐射波段的光学器件。滤光片可以选择性地透射光谱的一部分,同时拒绝透射其余部分。光学滤光片常用于显微镜、光谱学、化学分析和机器视觉。

透过率(T):假设光初始值为100%,通过滤光片后会有所损耗,通过后测得出只有初始值的80%,那么就说这个滤光片的光学透过率只有80%。

中心波长 (CWL):用于定义带通滤光片的中心波长描述频谱带宽的中点,滤光片在此之上传输。具体是指带通滤光片在实际应用中所使用的波长,如光源主峰值是800nm LED灯,那需求的中心波长就是800nm。

半峰全宽 (FWHM):全称:full width at half maxima,简称FWHM。用来描述带通滤光片将传输的频谱带宽。是指该带宽的上限和下限是在滤光片达到最大透射率的 50% 时的波长下定义的。例如,如果滤光片的最大透射率是 90%,那么滤光片达到透射率 45% 时的波长将定义 FWHM 的上限和下限。10nm或更低的 FWHM 被认为是窄带,常用于激光净化和化学检测。25-50nm的 FWHM 常用于机器视觉应用;超过 50nm的 FHWM 被认为是宽带,常用于荧光显微镜应用。


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荧光滤光片一般包含三片组合,即激发滤光片、发射滤光片和二向色镜。

激发滤光片(Exciting Filter, Exciter Filter,Excitation Filter ):在荧光显微镜中,只有激发荧光的波长可通过的滤光片。过去使用的是短波通滤光片,现在基本上都使用带通滤光片。其外壳上刻有箭头,指示所推荐的光的传播方向。

发射滤光片(Emitting Filter,Emission Filter ,Barrier Filter,Emitter):选择并传输样本发出的荧光,其他范围光线截止。发射光的波长比激发光的波长要长(更加靠近红色)。可以选择带通滤光片或者长波通滤光片作为发射滤光片。其外壳上刻有箭头,指示所推荐的光的传播方向。

二向色镜(Dichroic Mirror,Dichroic Beamsplitter,Dichromatic Beamsplitter):又称二向色滤光片或分色镜。与显微镜的光路呈45°角放置。这片滤光片反射一种颜色光(激发光)并且透射另一种颜色光(发射光),激发光的反射率大于90%,发射光的透射率大于90%。光谱中不能透过的部分被反射而不是被吸收。滤光片在透射光和反射光下的颜色互为补色,因而又称二向色滤光片。

荧光滤光片(Fluorescence Filters)是荧光成像滤光片的简称,是应用于生物医学和生命科学仪器的关键元件,主要作用是在生物医学荧光检验分析系统中分离和选择物质的激发光与发射荧光的特征波段光谱。通常要求滤光片截止深度在OD5(optical density,光密度,OD=-lgT)以上。应用于荧光检测系统的滤光片的核心要求是高截止陡度、高透过率、高定位精度、高的截止深度以及优良的环境稳定性


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像面尺寸

闭路监控摄像机有多种不同尺寸规格的传感器,屏幕高宽比通常是4:3(水平宽度:垂直高度)。传感器的尺寸规格对视场角有影响,使用相同的镜头在较小的传感器上的视场角更窄。镜头的规格与视场角无关,它仅仅需要使图像覆盖整个传感器,也就是说,同样大小或者更大规格的摄像机。这也表示,1/3”的摄像机可以用1/3”- 1/”的所有镜头,例如,1/3”12mm镜头与2/3” 12mm镜头的视场角是一样的。后者的图像像素和成像质量提升,因为只取得镜头中心部分的图像,而这部分范围的图像通常更加锐利。

 

焦距

来自无穷远物距的光线在镜头内部汇聚在光轴上的一个共同的点上。闭路监控摄像机的传感器聚焦的那个点,叫做焦点。在光学设计中,镜头有2个主点,一个主要主点和一个次要主点,次要主点和焦点之间的距离决定了镜头的焦距。

 

视场角

视场角是指镜头到图像传感器边缘连线的夹角。从理论上讲,在不考虑摄像机像面大小时,一个镜头的焦距是固定的,视场角则固定。 但实际上视场角的大小也会随着相面尺寸的变化而变化。当相面尺寸大小固定时,如果焦距变短,视场角会相应的变大。目录中的焦距是额定焦距,因此根据公式算出来的视场角是估算值。

光圈

是衡量镜头通光量的指数。光圈值由F值表示,F值越小,通光量越大,镜头所形成的图像越明亮。F值与镜头孔径成反比,与焦距成正比。

比值公式如下:

F值= f / D(f: 焦距,D=镜头孔径)

自动光圈与手动光圈

镜头大致分为直流驱动光圈,视频驱动光圈,手动光圈三种。 直流驱动光圈是由镜头内部线路来控制的,视频驱动光圈内部有装一个放大器,是由视频信号及摄像机提供的直流电来控制的。手动光圈是通过由镜头外部调节环来手动调节实现光圈变化的。

景深

景深是指在摄影机镜头聚焦完成后,在焦点前后的范围内都能形成清晰的像,这一前一后的距离范围,便叫做景深。

光圈、镜头、及拍摄物的距离是影响景深的重要因素:

1.光圈越大景深越小,光圈越小景深越大。

2.镜头焦距越长景深越小、反之景深越大。

3.主体越近,景深越小,主体越远,景深越大。

4.近景深比远景深大。

最近物距

最近物距是指镜头最前端镜片中心点到最近的可以清晰成像的物体的距离。

CS和C接口

CS 接口的镜头后法兰距为12.5mm,C接口的后法兰距为17.5mm。 CS接口的镜头只能匹配CS接口的摄像机,但是C接口的镜头除了可以匹配C接口的镜头外还可通过加一个5mm的C转CS接圈来匹配CS接口的摄像机。

后法兰距离,后焦距,机械后焦距

后法兰距是指从镜头接口处到摄像机传感器之间的距离。

后焦距是指从镜头最后一片镜片中心点到摄像机传感器之间的距离。

机械后焦距是指镜头接口最前端到摄像机传感器之间的距离。

非IR镜头与IR镜头的对比

日夜两用摄像机一般用在夜间近红外或者红外环境。 如果用不带IR矫正功能的镜头匹配日夜两用摄像机,那么摄像机在夜间使用时将无法清晰聚焦。 EVETAR镜头采用玻璃镜片辅以特殊的光学设计以及多层镀膜来减少光的折射以达到日夜共焦。 这样一来,摄像机在夜间使用的时候就不需要再重新聚焦。

百万像素

CCD和CMOS图像传感器利用的是按二维网格排列的像素。这些像素把光学图像转换成电子信号。一个图像上像素的多少通常决定了图像的分辨率,更多的像素意味着更高的分辨率。百万像素就是有一百万个像素。而百万像素摄像机就是使用百万像素传感器的摄像机。


 

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滤波是光学在成像、识别等过程中的必备环节,如:

1、红外截止滤光片 :允许可见光透过,截止或反射红外光的光学滤光片,产品应用于手机、相机、车载、PC、平板电脑、安防监控等成像摄像头。

2、低通滤光片 :滤除高频光波引起的莫尔条纹、色差补正等,产品应用于数码相机、摄像机、监控器。

3、屏下指纹滤光片 :实现绿光透过,其余光截止。

4、窄带滤光片 :在玻璃等基材表面镀制近红外波段的窄带通膜系,实现特定波段入射光高透过,其他波段深截止的功能,同时满足大角度入射时较低的光谱偏移。产品应用于距离传感器、3D摄像头发射及接收端模组。

近年来,随着手机多摄、潜望式长焦镜头、前置3D结构光、后置TOF、屏下指纹、后玻璃面板等技术发展,公司产品在手机中的应用不断增加,单机价值量持续增加。

 

多摄:带动红外截止滤光片持续成长

红外截止滤光片(IR-Cut filter) 是一种允许可见光透过而截止红外光的光学滤光片。当光线进入镜头,折射后可见光和红外光会在不同靶面成像,可见光成像为彩色,红外光成像为黑白。当把可见光所成图像调试好之后,红外光会在此靶面形成虚像,影响图像的颜色和质量。

红外截止滤光片又可细分为两种,一种是反射式滤光片,另一种是吸收式滤光片。滤光片最关键的工艺是镀膜,需要保证镀膜的均匀性和一致性,镀膜又可分为真空镀膜和化学镀膜两种方式。镀膜之后基本可以滤除650nm以上波长的光,满足基本的使用需求。

以蓝玻璃为基材镀膜制成的IRCF,是采用吸收的方式过滤红外光,可过滤630nm以上波长的光,比较彻底;而以普通玻璃为基材镀膜所制成的IRCF是以反射的方式过滤掉红外光,反射光容易造成干扰,效果差于蓝玻璃IRCF。

3D摄像头中的重要构成元件——窄带滤光片

窄带滤光片 是只允许特定波长的光通过而滤除其余波长的光的光学元件。3D Sensing的发射端会发射940nm波长的红外光,接收端需要滤除其余波长的光而仅仅接受940nm红外光,所以需要使用窄带滤光片。窄带滤光片的通带相对比较窄,一般要求在中心波长值的5%以下。

窄带滤光片的薄膜一般由低折射率和高折射率的两种膜组成,叠加后层数达几十层,每一层薄膜的参数漂移都可能影响最终性能;而且窄带滤光片透过率对薄膜的损耗非常敏感,所以制备峰值透过率很高、半带宽又很窄的滤光片非常困难。制备薄膜的方法有很多种,包括化学气相沉积、热氧化法、阳极氧化法、溶胶凝胶法、原子层沉积(ALD)、原子层外延(ALE)、磁控溅射等,而不同方法制备的薄膜性能差异很大。

 

屏下指纹:屏下指纹快速渗透,滤光片需求扩大

随着屏下指纹识别方案渗透率不断提升,滤光片需求进一步上升。


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荧光,汉语词语。又作“萤光”,是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后进入激发态,并且立即退激发并发出比入射光的波长长的出射光(通常波长在可见光波段);很多荧光物质一旦停止入射光,发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。另外有一些物质在入射光撤去后仍能较长时间发光,这种现象称为余辉。在日常生活中,人们通常广义地把各种微弱的光亮都称为荧光,而不去仔细追究和区分其发光原理。 也指温度(不是色温)低的冷光。

荧光产生的原理

光照射到某些原子时,光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道,即从基态跃迁到第一激发单线态或第二激发单线态等。第一激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的,所以会恢复基态,当电子由第一激发单线态恢复到基态时,能量会以光的形式释放,所以产生荧光。

荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下,发光波长比吸收波长较长,能量更低。但是,当吸收强度较大时,可能发生双光子吸收现象,导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。当辐射波长与吸收波长相等时,即是共振荧光。常见的例子是物质吸收紫外光,发出可见波段荧光,我们生活中的荧光灯就是这个原理,涂覆在灯管的荧光粉吸收灯管中汞蒸气发射的紫外光,而后由荧光粉发出可见光,实现人眼可见。

荧光的参数

(1)激发光谱:发光材料在不同波长光的激发下,该材料的某一发光谱线与谱带的强度或发光效率与激发光波长的关系。

(2)发射光谱:发光材料在某一激发光的激发下,其不同波长的发光强度的强弱变化。

(3)荧光强度:荧光强度与该种物质的荧光量子产率、消光系数以及含量等因素有关。

(4)荧光量子产率Q:量子产率表示物质将吸收的光能转化为荧光的本领,是荧光物质发出光子数与吸收光子数的比值。

(5)斯托克司(Stokes)位移:斯托克司位移为最大荧光发射波长与最大吸收波长之差。

(6)荧光寿命:当一束光激发荧光物质时,荧光物质的分子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态,再以辐射的形式发出荧光回到基态,激发停止时,分子的荧光强度降低到激发时最大强度的1/e时所需的时间为荧光寿命。

 

硒化镉量子点在紫外线的照射下发出荧光

荧光的应用领域

照明

荧光灯

常见的荧光灯就是一个例子。 灯管内部被抽成真空再注入少量的水银。灯管电极的放电使水银发出紫外波段的光。这些紫外光是不可见的,并且对人体有害。所以灯管内壁覆盖了一层称作磷(荧)光体的物质,它可以吸收那些紫外光并发出可见光。

可以发出白色光的发光二极管(LED)也是基于类似的原理。由半导体发出的光是蓝色的,这些蓝光可以激发附着在反射极上的磷(荧)光体,使它们发出橙色的荧光,两种颜色的光混合起来就近似地呈现出白光。

荧光笔

荧光笔有荧光剂,它遇到紫外线(太阳光、日光灯、水银灯比较多)时会产生荧光笔荧光效应,发出白光,从而使颜色看起来有刺眼的荧光感觉。 荧光笔的荧光跟我们手表、荧光棒的荧光原理不相同,荧光棒是内部发生放射性反应,产生的射线激发外周的荧光粉发光,因此它们在夜里没有任何紫外线的情况下都能发光。而荧光笔则一定有紫外线情况下才会发荧光,这一点你只要把荧光笔的笔迹靠近捕蚊灯、验钞机就可以看得非常清楚。

生化和医疗

荧光在生化和医药领域有着广泛的应用。人们可以通过化学反应把具有荧光性的化学基团粘到生物大分子上,然后通过观察示踪基团发出的荧光来灵敏地探测这些生物大分子。

采用荧光标记的链终止剂所得到的DNA测序图

用于对DNA进行自动测序的链末端终止法:在原初的方法中,需要对DNA的引物端进行荧光标记,以便在测序凝胶板上确定DNA色带的位置。在改进的方法中,对作为链终止剂的4种双脱氧核苷酸(ddTBP)分别进行荧光标记,电泳结束后不同长度的DNA分子彼此分开,经紫外线照射,4种被标记的双脱氧核苷酸发出不同波长的荧光。通过分析荧光的光谱便可以分辨出DNA的序列。DNA探测:溴化乙啶是一种荧光染料,当它在溶液中自由改变构型时,只能发出很弱的荧光;当它嵌入核酸双链的碱基对之间与DNA分子结合后,便可以发出很强的荧光。因此在凝胶电泳中,一般加入溴化乙啶对DNA染色。DNA微阵列(生物芯片):需要对基因组探针进行荧光标记,最后通过荧光信号确定靶标序列。免疫学中的免疫荧光检查法:对抗体进行荧光标记,从而可以根据荧光的分布和形态确定抗原的部位和性质。流式细胞仪(又称荧光激活细胞分选器,FACS) :对样本细胞进行荧光标记,再用激光束激发使之产生特定的荧光,然后用光学系统检测并将信号传输到计算机进行分析,从而得到细胞相应的各种特性。荧光技术还被应用于探测和分析DNA及蛋白质的分子结构,尤其是比较复杂的生物大分子。水母发光蛋白最早是从海洋生物水母(Aequorea victoria)中分离出来的。当它与Ca离子共存时,可以发出绿色的荧光。这一性质已经被应用于实时观察细胞内Ca离子的流动。水母发光蛋白的发现推动了人们进一步研究海洋水母并发现了绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)。绿色荧光蛋白的多肽链中含有特殊的生色团结构,无需外加辅助因子或进行任何特殊处理,便可以在紫外线的照射下发出稳定的绿色荧光,作为生物分子或基因探针具有很大的优越性,所以绿色荧光蛋白及相关蛋白已经成为生物化学和细胞生物学研究的重要工具。萤光显微成像技术:全内反射荧光显微镜很多生物分子具有内禀的荧光性,不需要外加其他化学基团就可以发出荧光。有时侯这种内禀的荧光性会随着环境的改变而改变,从而可以利用这种对环境变化敏感的荧光性来探测分子的分布和性质。例如胆红素与血清白蛋白的一个特殊位点结合时,可以发出很强的荧光。又如当血红细胞中缺少铁或者含有铅时,会产生出锌原卟啉而不是正常的血红素(血红蛋白);锌原卟啉具有很强的荧光性,可以用来帮助检测病因。

宝石、矿物

宝石,矿物,纤维以及其他一些可以作为犯罪取证的材料可以在紫外线或者X射线的照射下发出不同性质的荧光。

红宝石、翡翠、钻石可以在短波长的紫外线下发出红色的荧光,绿宝石、黄晶(黄玉)、珍珠也可以在紫外线下发出荧光。钻石还可以在X射线下发出磷光。

概念区分

由光照(通常是紫外线或X射线)激发所引起的发光称为光致发光,例如荧光和磷光;由化学反应所引起的发光称为冷光,演唱会上用的荧光棒是通过两种化学液体混合后发生化学反应发光的;由阴极射线(高能电子束流)所引起的发光称为阴极射线发光,电视机显像管的荧光屏发光就是阴极射线发光;生物体的冷发光现象是生物发光,比如萤火虫发出的光,是“萤光”,“萤”字在古汉语中与“荧”字通假,部分华文地区,“萤”字与昆虫有关。荧光在台湾多称萤光;在中国大陆多称荧光,而“萤光”则通常是指萤火虫发出的光。

仪器

测荧光一定要有仪器。通常用来检测物质所含荧光量的仪器我们称之为荧光分光光度计。

荧光分析仪的基本结构:激发光源、激发单色器、样品室、发射单色器及检测系统


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1. 使用光学镜片时要戴指套,若手上有酸、盐等容易腐蚀玻璃表面的物质,不要直接用手接触光学镜片,会导致光学镜片上产生印迹,若长时间不擦掉印迹,有可能成为永久性斑印,影响光学元件成像质量。

2. 使用光学镜片时,要轻拿轻放,光学镜片很多是玻璃制品,容易造成碰伤,崩边,划伤。

3. 移动光学镜片时要拿镜片的边缘,不要直接接触透光面,即使佩戴指套也不能直接接触。

4. 不使用光学镜片时,要放置在软的物体表面,不要直接将裸片放在玻璃、金属、桌面或不干净的纸面上,这样容易造成镜片划伤。

5. 当镜片表面有灰尘时,使用干净洗耳球把尘吹落。

6. 当镜片有污迹或汗迹时,使用擦镜纸或绸布蘸酒精或丙酮轻轻擦洗。

7. 当储存镜片时,使用干净的电容纸或擦镜纸包装镜片,储存在温度适中以23℃左右为宜,湿度40%以下的环境中,如果有条件的话,可以储存在干燥柜中。

8. 当储存镜片时,光学镜片之间不要堆放在一起,每个镜片之间不能重叠摆放。

9. 当镜片脏了时,要立刻清洗,但要注意防止划伤镜片,灰尘很容易造成镜片划伤。


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酶标仪,即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器。实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来分析抗原或抗体的含量。

 

酶标法是什么

酶联免疫吸附试验方法简称酶标法,是标记技术中的一种,是从荧光抗体技术,同位素免疫技术发展而来的一种敏感,特异,快速并且能自动化的现代技术。

酶标法的基本原理是将抗原或抗体与酶用胶联剂结合为酶标抗原或抗体,此酶标抗原或抗体可与固相载体上或组织内相应抗原或抗体发生特异反应,并牢固地结合形成仍保持活性的免疫复合物。当加入相应底物时,底物被酶催化而呈现出相应反应颜色。颜色深浅与相应抗原或抗体含量成正比。

由于此技术是建立在抗原-抗体反应和酶的高效催化作用的基础上,因此,具有高度的灵敏性和特异性,是一种极富生命力的免疫学试验技术。

 

酶标仪的原理

酶标仪就是应用酶标法原理的仪器,酶标仪类似于一台变相光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。

光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号,电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,之后由显示器和打印机显示结果。

微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程。而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单。

微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,孔内都包埋着相应的抗原或抗体,微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液。其常见规格有40孔板,55孔板,96孔板等多种,不同的仪器选用不同规格的孔板,对其可进行一孔一孔地检测或一排一排地检测。

酶标仪测定是在特定波长下,检测被测物的吸光值。随着检测方式的发展,拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪,可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。

酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长,而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片,只能截取特定波长进行检测。

 

酶标仪结构

酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得,也可用分光光度计相同的单色器来得到。在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样,滤光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的。光源灯发出的光经聚光镜,光栏后到达反射镜,经反射镜作90°反射后垂直通过比色溶液,然后再经滤光片送到光电管。

酶标仪可分为单通道和多通道2种类型,单通道又有自动和手动2种之分。自动型的仪器有X,Y方向的机械驱动机构,可将微孔板L的小孔一个个依次送入光束下面测试,手动型则靠手工移动微孔板来进行测量。

在单通道酶标仪的基础上又发展了多通道酶标仪,此类酶标仪一般都是自动化型的。它设有多个光束和多个光电检测器,如12个通道的仪器设有12条光束或12个光,12个检测器和12个放大器,在X方向的机械驱动装置的作用下,样品12个为一排被检测。多通道酶标仪的检测速度快,但其结构较复杂价格也较高。


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荧光显微镜是光学显微镜的一种,一般被观察物是透明的,或者内部结构不能很好地从颜色上进行很好的区分,那么荧光显微镜是一个不错的选择,能够解决普通显微镜无法观察透明物质的问题。荧光显微镜其原理是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,从而让观察者对样品的内部结构进行观察。在荧光显微镜上,必须在标本的照明光中,选择出特定波长的激发光,以产生荧光,然后必须在激发光和荧光混合的光线中,单把荧光分离出来以供观察。因此,在选择特定波长中,滤光片系统成为极其重要的角色。荧光显微镜广泛应用于生物,医学等领域。

荧光显微镜包括以下基本元件:

a.光源: 通常是氙弧灯或汞灯,但近年来也使用高功率LED

b.滤光片(入射光): 将入射光波长缩减到只留下用于激发样品的波长,有趣的是,其被称为激发滤光片

c.二向分色镜或反射镜:  将激发光反射到样品上,并同时只通过来自样品的发射光,传递到检测仪(如下图)

d.滤光片(发射光): 只能通过来自样品的发射光波长,并阻挡所有通过激发滤光片的光线,如您所想,其被称为发射滤光片

e.CCD照相机: 发射光如果不能检测到,则没有任何用处;对于荧光成像来说,检测仪通常是CCD照相机,这种照相机一般也连接到电脑屏幕,能够为您呈现图像

 

二向分色镜允许较长波长的光线通过滤光片,同时反射较短波长的光线

 

荧光显微镜分类: 

荧光显微镜一般分为透射和落射式两种类型:

a.透射式:激发光来自被检物体的下方,聚光镜为暗视野聚光镜,使激发光不进入物镜,而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮,而高倍则暗,在油浸和调中时,较难操作,尤以低倍的照明范围难于确定,但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。

b.落射式:透射式目前几乎被淘汰,新型的荧光显微镜多为落射式,光源来自被检物体的上方,在光路中具有分光镜,所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用,不仅便于操作,而且从低倍到高倍,可以实现整个视场的均匀照明。

 

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