Introduction aux instruments de marquage des enzymes
Le marqueur enzymatique, c'est-à-dire le détecteur d'essai immunoenzymatique, est un instrument spécial pour l'essai immunoenzymatique. Il s'agit en fait d'un colorimètre photoélectrique spécial ou d'un spectrophotomètre déguisé, dont le principe de fonctionnement et la structure principale sont fondamentalement les mêmes que ceux du colorimètre photoélectrique. Il peut être divisé en deux catégories : semi-automatique et automatique, mais son principe de fonctionnement est fondamentalement le même, et son cœur est un colorimètre, c'est-à-dire l'analyse de la teneur en antigène ou en anticorps par une méthode colorimétrique.
Qu'est-ce qu'un dosage enzymatique ?
La méthode ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) est l'une des techniques de marquage, développée à partir de la technique des anticorps fluorescents et de la technique d'immunodosage isotopique, qui est une technique moderne, sensible, spécifique, rapide et automatisée.
Le principe de base du marquage enzymatique consiste à combiner un antigène ou un anticorps avec une enzyme à l'aide d'un collagène pour former un antigène ou un anticorps marqué par une enzyme, qui peut réagir spécifiquement avec l'antigène ou l'anticorps correspondant sur le support en phase solide ou dans le tissu, et se lier fermement pour former un complexe immunitaire qui reste actif. Lorsque le substrat correspondant est ajouté, il est catalysé par l'enzyme et présente la couleur de réaction correspondante. La couleur est proportionnelle à la quantité d'antigène ou d'anticorps correspondant.
Comme cette technique est basée sur la réaction antigène-anticorps et la catalyse efficace des enzymes, elle est très sensible et spécifique, ce qui en fait une technique de test immunologique extrêmement viable.
Principe de l'instrument de marquage des enzymes
L'étiqueteur enzymatique est l'application du principe de l'instrument d'étiquetage enzymatique, l'étiqueteur enzymatique est similaire à un colorimètre photoélectrique à changement de phase ou à un spectrophotomètre, son principe de fonctionnement de base et sa structure principale sont fondamentalement les mêmes que ceux du colorimètre photoélectrique.
L'onde lumineuse provenant de la lampe source est transformée en un faisceau de lumière monochromatique à travers le filtre ou le monochromateur, qui pénètre dans l'échantillon à tester dans le pôle microporeux en plastique. La lumière monochromatique est partiellement absorbée par le spécimen, l'autre partie est irradiée à travers le spécimen vers le détecteur photoélectrique, le détecteur photoélectrique sera différents spécimens à tester et l'intensité des différents signaux lumineux dans les signaux électriques correspondants, les signaux électriques par le préamplificateur, l'amplification logarithmique, le convertisseur analogique-numérique et d'autres traitements de signaux sont envoyés au microprocesseur pour le traitement des données et les calculs, et ensuite par l'affichage et l'imprimante pour montrer les résultats.
Le microprocesseur déplace également la microplaque en contrôlant le mouvement du mécanisme d'entraînement mécanique dans les directions X et Y par l'intermédiaire du circuit de commande, réalisant ainsi un processus d'essai automatisé d'alimentation des échantillons. D'autres étiqueteurs d'enzymes utilisent le mouvement manuel de la plaque de microtitration pour la détection, éliminant ainsi le besoin de mécanismes d'entraînement mécanique et de circuits de commande dans les directions X et Y, ce qui permet d'obtenir un instrument plus petit et plus simple.
La plaque de microtitration est une sorte de plaque en plastique transparent spécialement conçue pour placer des échantillons à tester par traitement préalable. La plaque comporte de nombreuses rangées de petits trous de taille uniforme, dans lesquels sont insérés l'antigène ou l'anticorps correspondant, et chaque petit trou de la plaque de microtitration peut contenir quelques millilitres de solution. Les spécifications courantes sont les suivantes : plaque à 40 puits, plaque à 55 puits, plaque à 96 puits, etc. Différents instruments utilisent différentes spécifications de la plaque, qui peuvent être détectées trou par trou ou rangée par rangée.
Un essai zymographique est la détection de la valeur d'absorbance d'une substance mesurée à une longueur d'onde spécifique. Avec le développement des essais, les marqueurs enzymatiques uniques de paillasse avec plusieurs modes de détection sont appelés marqueurs enzymatiques multifonctionnels, qui peuvent détecter l'absorbance (Abs), l'intensité de fluorescence (FI), la fluorescence résolue dans le temps (TRF), la polarisation de la fluorescence (FP) et la chimiluminescence (Lum).
Les marqueurs enzymatiques peuvent être divisés en marqueurs enzymatiques de type à grille et en marqueurs enzymatiques de type à filtre en fonction de leur principe. Les marqueurs enzymatiques de type grille peuvent intercepter n'importe quelle longueur d'onde dans la gamme de longueurs d'onde de la source lumineuse, tandis que les marqueurs enzymatiques de type filtre ne peuvent intercepter que des longueurs d'onde spécifiques pour la détection en fonction des filtres optionnels.
Structure du marqueur enzymatique
La lumière monochromatique utilisée dans l'étiqueteur d'enzymes peut être obtenue soit au moyen d'un filtre cohérent, soit en utilisant le même monochromateur que dans le spectrophotomètre. Dans l'utilisation de filtres comme dispositif de filtrage avec le colorimètre ordinaire, le filtre peut être placé devant la microplaque, ou derrière la microplaque, l'effet est le même. La lumière émise par la lampe source traverse le miroir condensateur, la colonne lumineuse après avoir atteint le réflecteur, le réflecteur pour 90 ° de réflexion verticale à travers la solution colorimétrique, et ensuite envoyé au tube photoélectrique à travers le filtre.
Les étiqueteuses enzymatiques peuvent être divisées en deux types : à canal unique et à canaux multiples, et à canal unique en deux types : automatique et manuel. Le type automatique possède un mécanisme d'entraînement mécanique dans les directions X et Y, qui peut envoyer les petits puits de la microplaque L un par un sous le faisceau de lumière pour les tester, tandis que le type manuel repose sur le mouvement manuel de la microplaque pour effectuer les mesures.
Sur la base de l'étiqueteur enzymatique à canal unique, un étiqueteur enzymatique à canaux multiples a été mis au point ; cet étiqueteur enzymatique est généralement de type automatisé. Il est équipé de plusieurs faisceaux lumineux et de plusieurs photodétecteurs, par exemple 12 canaux de l'instrument sont équipés de 12 faisceaux lumineux ou de 12 lumières, de 12 détecteurs et de 12 amplificateurs, dans la direction X du dispositif d'entraînement mécanique sous l'action des échantillons 12 pour une rangée à détecter. Les étiqueteurs enzymatiques multicanaux ont une vitesse de détection rapide, mais leur structure est plus complexe et plus coûteuse.
Schéma de l'étiqueteur d'enzymes